PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

The use of frozen cells allows studies on diseases and other immunological assays, since it facilitates the logistics of collecting and transporting, including laboratories located in different cities or other countries. The objectives of this study were to verify if the storage in the refrigerator after collection at different times changes the viability of total leukocytes after months of freezing and the ratio of CD4/CD8 is affected by the freezing process. Venous blood of 15 healthy horses was used and the experiment was divided into 2 stages. In the first, the viability of the leukocytes before and after freezing was verified, as well as different storage times in the refrigerator (fresh blood, stored for 24 and 48 hours) before the freezing process. In the second part, the immunophenotyping of the T lymphocytes was performed, in order to observe if after thawing the relationship between LT CD4 and LT CD8 undergoes change. There was no difference between the amounts of viable leucocytes from frozen fresh blood compared to fresh blood before freezing, nor difference between the viability of blood left in the refrigerator (4°C) for 24 hours and fresh blood and fresh frozen blood. There was a decrease in viability of frozen leukocytes after 48 hours left in the freezer for other samples; however, the recovery was 107x cells. Regarding the immunophenotyping of CD2CD4+ and CD2CD8+ double-labeled T lymphocytes in the blood stored in the refrigerator for 24 hours before freezing, no difference was observed between before and after 6 months of freezing. It is concluded that cryopreservation of equine total leukocytes is possible and, although there was a difference between freezing times, even in the less viable sample, sufficient numbers of cells were recovered for other immunological assays.

• Cryopreservation lymphocytes immunology horses immunophenotyping mononuclear cells

Abstract in Portuguese:

A utilização de células congeladas possibilita estudos sobre doenças e outros ensaios imunológicos, pois facilita a logística de coleta e transporte, inclusive para laboratórios localizados em cidades diferentes ou outros países. Os objetivos desse estudo foram verificar se o armazenamento sobre refrigeração em diferentes tempos e a criopreservação alteram a viabilidade de leucócitos totais e se a relação entre LT CD4/CD8 é afetada pelo processo de congelamento. Utilizou-se sangue venoso de 15 cavalos hígidos e o experimento foi dividido em 2 etapas. Na primeira foi analisado se houve alteração na viabilidade dos leucócitos provenientes de amostras de sangue armazenadas em diferentes tempos em geladeira antes e depois de 6 meses de congelamento a -80°C. Na segunda parte, realizou-se a imunofenotipagem dos linfócitos T, com a finalidade de observar se após o descongelamento a relação entre LT CD4 e LT CD8 sofre alteração. Não houve diferença entre a quantidade de leucócitos viáveis da amostra de sangue fresco descongelado em relação ao sangue fresco antes do congelamento, nem diferença entre a viabilidade do sangue deixado em congelador (4°C) por 24 horas e do sangue fresco. Houve uma diminuição da viabilidade dos leucócitos, após o descongelamento de 6 meses (-80°C), das amostras de sangue deixado em geladeira por 48 horas antes do congelamento em relação às outras amostras, porém, a recuperação foi de células x107. Quanto à imunofenotipagem de linfócitos T com dupla marcação CD2CD4+ e CD2CD8+, no sangue armazenado em geladeira por 24 horas antes do congelamento, e não foi observada diferença entre antes ou depois de 6 meses de congelamento. Conclui-se que a criopreservação de leucócitos totais de equinos é possível e, embora tenha havido diferença entre os tempos de congelamento, mesmo na amostra menos viável, houve recuperação de uma quantidade de células suficientes para outros ensaios imunológicos.

• Criopreservação linfócitos imunologia equinos imunofenotipagem células mononucleares

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fernandes W.R., Rodrigues J.A., Michima L.E.S. & Siqueira R.F. 2012. [Oxidative stress evaluation in Standardbred horses through malondialdehyde (MDA) and erythrocytic reduced glutathione (GSH) mensuration.] Avaliação do estresse oxidativo em cavalos de trote através da mensuração de malondialdeído (MDA) e glutationa reduzida (GSH) eritrocitária. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7):677-680. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 15, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: refarinelli@yahoo.com.br Oxidative stress by physical exercise induces a lipidic peroxidation reaction in cellular membranes and damages in proteins and nucleic acids. Malondialdehyde (MDA) is one of the final products of this reaction. Erythrocytic reduced glutathione (GSH), a multifunctional antioxidant, is present in the plasma and erythrocyts and it represents the total antioxidant suitability of the organism after an oxidative stress. The aim of this study was to evaluate the oxidative stress in different physical exercise conditions through serum MDA and erythrocytic GSH measurement in 45 American Trotter and crossbred horses distributed in three groups: G1 (no physical exercise), G2 (until 6 months of regular physical exercise) and G3 (more than 12 months of regular physical exercise). In the animals with no physical exercise MDA values were lower than the others. There was no difference in GSH values corrected by hemoglobin (Hb) or hematocrit (VG) values among the groups. However, there was a tendency of greater values in G2, where their antioxidant system is adapting to the regular physical exercises and their consequent damages. We conclude that physical exercises induce cellular damage by oxidative stress, but the antioxidant system keeps the homeostasy and it is capable to adapt itself to the free radicals harm.

• Oxidative stress malondialdehyde glutathione estresse oxidativo malondialdeído glutationa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fernandes W.R., Rodrigues J.A., Michima L.E.S. & Siqueira R.F. 2012. [Oxidative stress evaluation in Standardbred horses through malondialdehyde (MDA) and erythrocytic reduced glutathione (GSH) mensuration.] Avaliação do estresse oxidativo em cavalos de trote através da mensuração de malondialdeído (MDA) e glutationa reduzida (GSH) eritrocitária. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7):677-680. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 15, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: refarinelli@yahoo.com.br O estresse oxidativo, decorrente de uma atividade física, leva a peroxidação lipídica de membranas celulares, além de danos protéicos e em ácidos nucléicos, e um dos produtos finais desta reação é o malondialdeído (MDA). A glutationa reduzida (GSH), considerada um antioxidante multifuncional, está presente no plasma e principalmente nas hemácias e tem importância pelo fato de ser um dos índices da capacidade total antioxidante do corpo após um estresse oxidativo. Com o objetivo de avaliar o estresse oxidativo em diferentes condições de treinamento físico, determinaram-se a concentração de MDA sérico e GSH eritrocitária em 45 cavalos da raça American Trotter e mestiços divididos em três grupos: G1 (sem treinamento), G2 (até 6 meses de treinamento) e G3 (treinamento há mais de 12 meses). Observou-se que o MDA teve um valor significativamente menor no grupo de animais sem treinamento físico. Não houve diferença estatística significante para GSH corrigida pela Hb e para GSH corrigida pelo VG entre os grupos analisados, mas houve uma aparente tendência a maiores valores no G2, no qual o sistema antioxidante está em fase de adaptação ao treinamento físico constante e suas consequentes injúrias. Conclui-se que a atividade física acarreta danos celulares frente ao estresse oxidativo, mas o sistema antioxidante tem papel fundamental nesta homeostasia observando uma adaptação às injúrias causadas pelos radicais livres.